離心是一重要的樣品分離、分析技術(shù),在醫學(xué)實(shí)驗室乃至相關(guān)領(lǐng)域得到廣泛應用。
1 實(shí)驗室離心技術(shù)及離心機分類(lèi)
離心是在離心力的作用下,利用被離心樣品物質(zhì)的沉降系數、浮力、密度的差別,進(jìn)行分離、濃縮、提取制備樣品以及分析測定生物大分子分子量和純度。按其工作方式可分為離心過(guò)濾、離心沉降(或澄清)及離心分離。
離心機的設計原理是利用驅動(dòng)轉頭旋轉時(shí)所產(chǎn)生的離心場(chǎng)力加快樣品粒子的沉降速度,把樣品中不同沉降系數或浮力密度差的物質(zhì)分離開(kāi)。決定離心力大小的因素除轉速 (Revolved per minute,r/min)和離心(轉頭)半徑外,還與粒子在旋轉運動(dòng)中所受到的力(重力、浮力、摩擦力)之作用影響有關(guān)(如圖l所示),離心力方向與重力呈垂直,故常用相對離心力(Relative centrifugal force,rcO表示,即相對于重力作用在旋轉粒子上的離心力,用重力加速度g(980cm/s )作為量值,也稱(chēng)為“g-Force”,表達式為:RCF=o)~/980。
離心技術(shù)的關(guān)鍵是如何根據樣品粒子和介質(zhì)的性質(zhì)以及轉子的技術(shù)參數來(lái)確定離心力、轉速和離心時(shí)間設置。粒子(細胞、細胞器及大分子的統稱(chēng))的沉降或分離速率取決于離心力、粒子的大小、形狀和密度以及沉降介質(zhì)的密度和粘度。
根據用途、轉速、功能配置可將醫學(xué)實(shí)驗室常用醫用離心機大致分為以下幾種類(lèi)型:
主要用于細胞、血清、血漿以及批量樣品的分離制備,另在生物制藥領(lǐng)域發(fā)揮著(zhù)較大作用;高速離心機(High speed cen— trifuge)主要用于某些亞細胞器結構、核酸、蛋白質(zhì)、質(zhì)粒、細菌的分離和制備;而超速離心機(Ultracentrifuge).~0適應于病毒、核酸及蛋白質(zhì)的分離純化,進(jìn)一步的分析研究還可采用分析型超速離心機。
近年來(lái),有一種稱(chēng)之為“通用實(shí)驗室離心機(Universal lab— oratory centrifuge)”的機型進(jìn)入醫學(xué)實(shí)驗室,在性能上順應了分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域實(shí)驗技術(shù)的需要,倍受實(shí)驗室工作者的關(guān)注。其特點(diǎn)是兼顧了低速機和高速機、微量和較大容量的性能,但體積小、重量輕、耗電小、操作簡(jiǎn)便;常見(jiàn)機型最高轉速≥13 O00r/min,個(gè)別機型超過(guò)20O00r/min,起始轉速可低到100r/min;最大rcf一般可達20000~g以上,個(gè)別機型達到60000xg;離心容量最大可達3 000ml。本文重點(diǎn)討論此類(lèi)機型。